क्षारीय प्रोटीज
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क्षारीय प्रोटीज

क्षारीय प्रोटीज को धूप, गर्मी से दूर सूखी, ठंडी और अच्छी हवादार जगहों पर संग्रहित किया जाना चाहिए।

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आवेदन और सिद्धांत

इस क्षारीय प्रोटीज का उपयोग प्रोटीज गतिविधि को निर्धारित करने के लिए किया जाता है, जिसे पीसी इकाइयों के रूप में व्यक्त किया जाता है, जो बेसिलस सबटिलिस संस्करण से प्राप्त होती है। और बैसिलस लाइकेनफॉर्मिस var। परख 37 ° और पीएच 7.0 पर कैसिइन के 30 मिनट के प्रोटिओलिटिक हाइड्रोलिसिस पर आधारित है। निर्जलित कैसिइन को निस्पंदन द्वारा हटा दिया जाता है, और घुलनशील कैसिइन को स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप से निर्धारित किया जाता है।


अभिकर्मकों और क्षारीय प्रोटीज के समाधान
कैसिइन हैमरस्टेन-ग्रेड कैसिइन (यूनाइटेड स्टेट्स बायोकेमिकल कॉर्प, कैटलॉग नंबर 12840 या समकक्ष) का उपयोग करें।
Tris Buffer (pH 7.0) 12.1 ग्राम एंजाइम-ग्रेड (या समतुल्य) tris (hydroxymethyl) अमीनोमेथेन को 800 mL पानी में घोलकर 1 N हाइड्रोक्लोरिक एसिड के साथ pH 7.0 पर ले जाता है। 1000 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में स्थानांतरित करें, पानी के साथ मात्रा में पतला करें, और मिश्रण करें।
TCA सॉल्यूशन 18 ग्राम ट्राइक्लोरोएसेटिक एसिड और 19 ग्राम सोडियम एसीटेट ट्राइहाइड्रेट के 800 एमएल पानी में 1000 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में घोलकर, 20 एमएल ग्लेशियल एसिटिक एसिड मिलाते हैं, पानी के साथ मात्रा को पतला करते हैं और मिलाते हैं।
सब्सट्रेट समाधान 500 ग्राम पानी में एंजाइम ग्रेड ट्रिस (हाइड्रोक्सीमेथाइल) एमिनोमेथेन के 6.05 ग्राम भंग, 1 एन हाइड्रोक्लोरिक एसिड के 8 एमएल जोड़ें, और मिश्रण करें। इस समाधान में कैसिइन के 7 ग्राम को भंग करें, और उबलते पानी के स्नान में 30 मिनट के लिए गर्म करें, कभी-कभी सरगर्मी करें।
कमरे के तापमान को ठंडा करें, और 0.2 एन हाइड्रोक्लोरिक एसिड के साथ पीएच 7.0 को समायोजित करें, कैसिइन की वर्षा को रोकने के लिए, जोरदार सरगर्मी के साथ, धीरे-धीरे एसिड को जोड़ना। मिश्रण को 1000 एमएल वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क में स्थानांतरित करें, पानी के साथ मात्रा में पतला करें, और मिश्रण करें।

ट्रिस बफर का उपयोग करके नमूना तैयार करना, नमूना एंजाइम तैयारी का एक समाधान तैयार करें ताकि अंतिम कमजोर पड़ने के 2 एमएल में 10 और 44 बैक्टीरिया प्रोटीज इकाइयों के बीच हो।


क्षारीय प्रोटीज की प्रक्रिया
पिपेट 10.0 एमएल की सबस्ट्रेट सॉल्यूशन की 25- × 150 मिमी टेस्ट ट्यूब की प्रत्येक श्रृंखला में, प्रत्येक एंजाइम टेस्ट के लिए एक ट्यूब, प्रत्येक एंजाइम रिक्त के लिए एक ट्यूब और सब्सट्रेट रिक्त के लिए एक ट्यूब की अनुमति देता है। 37 °। 0.1 ° पर बनाए रखा पानी के स्नान में 15 मिनट के लिए ट्यूबों को संतुलित करें।
शून्य समय पर स्टॉपवॉच शुरू करना, संतुलित सब्सट्रेट में नमूना तैयार करने की तेजी से 2.0 एमएल पाइप करना। पानी के स्नान में ट्यूबों को मिलाएं, और बदलें। सब्सट्रेट रिक्त करने के लिए ट्रिस बफर (नमूना तैयारी के बजाय) के 2 एमएल जोड़ें। ठीक 30 मिनट के बाद, प्रतिक्रिया को रोकने के लिए प्रत्येक एंजाइम ऊष्मायन और सब्सट्रेट खाली करने के लिए TCA समाधान के 10 एमएल जोड़ें। एक अतिरिक्त 30 मिनट के लिए पानी के स्नान में ट्यूबों को गरम करें ताकि प्रोटीन पूरी तरह से जमा हो सके।
दूसरी हीटिंग अवधि के अंत में, प्रत्येक ट्यूब को जोर से हिलाएं, और 11 सेंटीमीटर व्हामन नंबर 42, या समकक्ष, फिल्टर पेपर के माध्यम से फ़िल्टर करें, छानना के पहले 3 एमएल को त्याग दें।
[नोट: छानना पूरी तरह से स्पष्ट होना चाहिए]
एक उपयुक्त स्पेक्ट्रोफोटोमीटर के साथ 275 एनएम पर, 1 सेमी सेल में प्रत्येक नमूना छानना के अवशोषण को निर्धारित करें, साधन को शून्य पर सेट करने के लिए सब्सट्रेट रिक्त से छानना का उपयोग करके। उपयुक्त एंजाइम रिक्त पढ़ने को घटाकर प्रत्येक रीडिंग को सही करें, और एयू के रूप में प्राप्त मूल्य को रिकॉर्ड करें।

स्टैंडर्ड कर्व ट्रांसफर 100.0 मिलीग्राम एल-टायरोसिन, क्रोमैटोग्राफिक-ग्रेड या समकक्ष (एल्ड्रिच केमिकल कंपनी), पहले 1000 एमएम वॉल्यूमेट्रिक फ्लास्क के लिए लगातार वजन तक सूख जाता है। 0.1 एन हाइड्रोक्लोरिक एसिड के 60 एमएल में भंग। जब पूरी तरह से भंग हो जाता है, तो पानी के साथ मात्रा का समाधान पतला करें, और अच्छी तरह मिलाएं। इस घोल में 1.0 एमएल में 100 ग्राम टाइरोसिन होता है। 75.0, 50.0, और 25.0 माइक्रोन प्रति tyrosine प्रति एमएल शामिल करने के लिए इस स्टॉक समाधान से तीन और dilutions तैयार करें। एक उपयुक्त स्पेक्ट्रोफोटोमीटर बनाम 0.006 एन हाइड्रोक्लोरिक एसिड पर 1 सेमी सेल में 275 एनएम पर चार समाधानों के अवशोषण को निर्धारित करें। टायरोसिन एकाग्रता बनाम अवशोषण की एक साजिश तैयार करें।


क्षारीय प्रोटीज की गणना
एक जीवाणु प्रोटीज यूनिट (पीसी) को एंजाइम की उस मात्रा के रूप में परिभाषित किया जाता है जो परख की शर्तों के तहत प्रति मिनट 1.5-t / mL L-tyrosine के बराबर पैदा करता है।
स्टैंडर्ड कर्व से, और प्रक्षेप से, 60 Lg / mL के tyrosine सांद्रता वाले समाधान के अवशोषण को निर्धारित करते हैं। 0.0115 के करीब का आंकड़ा प्राप्त किया जाना चाहिए। 1.5 Lg / mL के tyrosine सांद्रता वाले एक समाधान के बराबर अवशोषण प्राप्त करने के लिए 40 से प्रक्षेपित मूल्य को विभाजित करें, और इस प्रकार मान को रिकॉर्ड करें।
समीकरण द्वारा नमूना एंजाइम तैयारी की गतिविधि की गणना करें

PC / g = (AU / AS) × (22 / 30W)

जिसमें 22 अंतिम मात्रा है, प्रतिक्रिया मिश्रण के mL में; 30 का समय है, मिनट में, प्रतिक्रिया का; और डब्ल्यू वजन है, जी में, मूल नमूना लिया गया।

पैकेजिंग और क्षारीय प्रोटीज का भंडारण

ठोस खाद्य पैकेजिंग बैग, 25 किग्रा / बैरल।


क्षारीय प्रोटीज को धूप, गर्मी से दूर सूखी, ठंडी और अच्छी हवादार जगहों पर संग्रहित किया जाना चाहिए।

भुगतान :टी / टी, पेपैल, वेस्टर्न यूनियन, अलीबाबा व्यापार आश्वासन, वीजा, मास्टरकार्ड, ई-जाँच, भुगतान बाद में, नियंत्रण रेखा और आदि

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